薄層色譜掃描儀的操作方法及注意事項講解
更新時間:2022-10-20 | 點擊率:313
操作方法:
1、薄層板制備:除另有規(guī)定外,將1份固定相和3份水在研缽中向方向研磨混合,去除表面的泡后,倒入涂布器中,在玻璃板上平穩(wěn)地移動涂布器行涂布(厚度為0.2—0.3mm),取下涂好薄層的玻璃板,置水平臺上于室溫下晾干,后在110℃烘30分鐘。即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。
2、點樣:除另有規(guī)定外,用點樣器點樣于薄層板上,般為圓點,點樣基線距底邊2.0cm,點樣直徑為2——4mm,點間距離約為1.5—2.0cm,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時須注意勿損傷薄層表面。
3、展開:展開室如需預(yù)用展開劑飽和,可在室中加入足夠量的展開劑,并在壁上貼二條與室樣、寬的濾紙條,端浸入展開劑中,密封室的蓋,使系統(tǒng)平衡或按正文規(guī)定操作。將點好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5—1.0cm(切勿將樣點浸入展開劑中),密封室蓋,等展開至規(guī)定距離(般為10—15cm),取出薄層板,晾干,按各品種項下的規(guī)定檢測。
如需用薄層色譜掃描儀對色譜斑點作掃描檢出,或直接在薄層上對色譜斑點作掃描定量,則可用薄層掃描法。薄層掃描的方法,除另有規(guī)定外,可根據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點及使用說明,結(jié)合具體情況,選擇吸收法或熒光法,用雙波長或單波長掃描。由于影響薄層掃描結(jié)果的因素很多,故應(yīng)在保證供試品的斑點在定濃度范圍內(nèi)呈線性的情況下,將供試品與對照品在同塊薄層上展開后掃描,行并計算定量,以減少誤差。各種供試品,只有得到分離度和重現(xiàn)性好的薄層色譜,才能獲得滿意的結(jié)果。
注意事項:
1、所用玻璃板應(yīng)洗凈不掛水珠,光滑平整。
2、鋪板要均勻,厚度適宜,并于室溫下晾干后在110℃活化30分鐘,置于 有干燥劑的干燥箱或干燥器中備用。
3、點樣點般為圓點,不能太大。